La fixation est la première étape indispensable en histologie. Elle stoppe le métabolisme cellulaire, prévient l'autolyse (dégradation par les propres enzymes de la cellule) et la putréfaction (dégradation bactérienne). Le fixateur le plus courant est le formol (solution aqueuse de formaldéhyde à 10 %), qui crée des ponts entre protéines. D'autres fixateurs comme le Bouin ou le glutaraldéhyde sont utilisés pour des besoins spécifiques (microscopie électronique). Une bonne fixation préserve la morphologie tissulaire la plus proche possible de l'état vivant.
📖 Définition
Autolyse : destruction des cellules par leurs propres enzymes après la mort.
⭐ À retenir
Le formol (formaldéhyde à 10 %) est le fixateur de routine en histologie.
💡 À retenir : La fixation stabilise les structures cellulaires en créant des ponts entre protéines.
Complète la phrase
La fixation empêche l' des tissus.
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Du prélèvement au bloc
Inclusion en paraffine
Après fixation, le tissu doit être inclus dans un milieu solide pour permettre la coupe. On procède d'abord à une déshydratation par bains d'éthanol de concentration croissante, car la paraffine est hydrophobe. Le tissu est ensuite éclairci dans un solvant (ex : xylène) qui chasse l'alcool, puis imprégné de paraffine liquide à chaud. Enfin, le tissu est placé dans un moule où la paraffine refroidit et durcit, formant un bloc solide prêt à être coupé.
📢 Rappel
La déshydratation élimine l'eau car la paraffine est hydrophobe.
📖 Définition
L'enrobage consiste à inclure le tissu dans un bloc de paraffine.
💡 À retenir : L'inclusion en paraffine permet d'obtenir un bloc solide pour la coupe au microtome.
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Des tranches de quelques micromètres
Réalisation des coupes
Le bloc de paraffine est coupé à l'aide d'un microtome, un instrument de précision qui permet d'obtenir des rubans de sections de 3 à 10 µm d'épaisseur (5 µm en routine). Les coupes sont étalées sur un bain-marie chaud pour les déplisser, puis recueillies sur des lames de verre. Pour les examens extemporanés (diagnostic rapide peropératoire), on utilise un cryostat qui coupe le tissu congelé sans inclusion en paraffine.
📖 Définition
Le microtome est un instrument de précision permettant de réaliser des coupes fines.
💡 À retenir : Les coupes standard en paraffine ont une épaisseur de 5 µm.
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Révéler les structures cellulaires
Les colorations histologiques
Les coupes sont incolores et nécessitent une coloration pour visualiser les structures. La coloration standard est l'Hématoxyline-Éosine (H&E) : l'hématoxyline (colorant basique) colore les noyaux en bleu/violet, l'éosine (colorant acide) colore le cytoplasme et la matrice extracellulaire en rose. D'autres colorations existent : le PAS pour les polysaccharides (mucus), le trichrome de Masson pour le collagène, ou l'imprégnation argentique pour les fibres nerveuses.
📢 Rappel
Les colorants basiques se lient aux structures acides (ADN nucléaire).
⭐ À retenir
Hématoxyline = noyaux en bleu/violet, Éosine = cytoplasme en rose.
💡 À retenir : L'Hématoxyline-Éosine (H&E) est la coloration de routine en histologie.