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Méthodes de diagnostic moléculaire en génétique

Ce que tu dois retenir

Chapitre 1 — Pourquoi analyser l'ADN ?

Le diagnostic moléculaire identifie des mutations dans l'ADN pour confirmer ou prédire une maladie génétique.

Chapitre 2 — La PCR et ses variantes

La PCR amplifie des millions de fois une séquence d'ADN cible pour la rendre détectable.

Chapitre 3 — Séquençage Sanger et NGS

Le NGS a révolutionné le diagnostic en permettant de séquencer de nombreux gènes simultanément.

Chapitre 4 — Hybridation, puces et FISH

La FISH, les puces à ADN et la MLPA détectent des anomalies de structure ou de nombre de copies de gènes.

Teste-toi

1. Quelle technique permet d'amplifier spécifiquement une région d'ADN ?

AA. La PCR
BB. Le séquençage Sanger
CC. La FISH
DD. La CGH array
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Réponse : A — A. La PCR

La PCR (Polymerase Chain Reaction) est la technique de base pour amplifier une séquence d'ADN cible. Les autres méthodes sont des techniques d'analyse post-amplification ou d'hybridation.

2. Quel est l'avantage principal du séquençage de nouvelle génération (NGS) par rapport au séquençage Sanger ?

AA. Il est moins coûteux pour un seul gène
BB. Il permet d'analyser de nombreux gènes en parallèle
CC. Il ne nécessite pas d'amplification préalable
DD. Il est plus précis pour les petites mutations
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Réponse : B — B. Il permet d'analyser de nombreux gènes en parallèle

Le NGS permet de séquencer des millions de fragments simultanément, ce qui le rend idéal pour analyser des panels de gènes, l'exome ou le génome entier. Le séquençage Sanger reste la référence pour confirmer une mutation ponctuelle.

3. Quelle technique utilise des sondes fluorescentes pour visualiser des séquences directement sur les chromosomes ?

AA. La PCR en temps réel
BB. La MLPA
CC. La FISH
DD. Le séquençage Sanger
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Réponse : C — C. La FISH

La FISH (Fluorescence In Situ Hybridization) utilise des sondes marquées par un fluorochrome qui s'hybrident sur les chromosomes, permettant de localiser des séquences spécifiques et de détecter des anomalies de structure.

4. Quel type de mutation la technique MLPA permet-elle de détecter efficacement ?

AA. Les mutations ponctuelles faux-sens
BB. Les délétions ou duplications d'exons
CC. Les expansions de triplets
DD. Les mutations du promoteur
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Réponse : B — B. Les délétions ou duplications d'exons

La MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) est spécialement conçue pour quantifier le nombre de copies de séquences d'ADN, ce qui permet de détecter des délétions ou duplications d'exons entiers.

5. Dans une PCR en temps réel, que mesure-t-on pour suivre l'amplification ?

AA. La température du milieu réactionnel
BB. La fluorescence émise par des sondes
CC. La concentration en ADN polymérase
DD. La vitesse de migration des fragments
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Réponse : B — B. La fluorescence émise par des sondes

La PCR en temps réel (qPCR) utilise des sondes fluorescentes qui émettent un signal proportionnel à la quantité d'ADN amplifié, permettant un suivi en direct de la réaction.

6. Quel est le principe de la méthode de séquençage Sanger ?

AA. Hybridation sur puce
BB. Amplification aléatoire de fragments
CC. Terminaison de chaîne par didésoxynucléotides
DD. Coupure enzymatique de l'ADN
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Réponse : C — C. Terminaison de chaîne par didésoxynucléotides

La méthode Sanger utilise des didésoxynucléotides (ddNTP) qui, une fois incorporés, stoppent l'élongation de la chaîne d'ADN, générant des fragments de toutes les tailles qui sont ensuite séparés par électrophorèse pour lire la séquence.

7. Quelle technique est la plus adaptée pour détecter une variation du nombre de copies (CNV) à l'échelle du génome entier ?

AA. La PCR classique
BB. Le séquençage Sanger
CC. La CGH array
DD. La FISH
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Réponse : C — C. La CGH array

La CGH array (Comparative Genomic Hybridization sur puce) compare l'ADN du patient à un ADN de référence sur l'ensemble du génome, permettant de repérer des gains ou pertes de matériel chromosomique (CNV).

8. Dans le diagnostic de la mucoviscidose, on recherche fréquemment la mutation F508del. Que signifie 'del' ?

AA. Une substitution
BB. Une délétion
CC. Une insertion
DD. Une duplication
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Réponse : B — B. Une délétion

F508del indique une délétion (del) de la phénylalanine en position 508 de la protéine CFTR. C'est la mutation la plus fréquente dans la mucoviscidose.

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