Méthodes d’étude et techniques en histologie

L’histologie commence par un prélèvement représentatif, immédiatement orienté et fixé pour éviter l’autolyse. La fixation au formol stabilise les protéines et préserve l’architecture tissulaire, mais elle doit être adaptée au tissu et à la question posée. Après déshydratation et imprégnation, le tissu est inclus dans la paraffine puis coupé en fines sections au microtome. Les coupes sont ensuite étalées, colorées et montées sur lame pour être observées au microscope. Chaque étape peut créer des artefacts : une mauvaise fixation ou une coupe épaisse peut fausser l’interprétation.

L’H&E associe l’hématoxyline, qui colore les noyaux en bleu-violet, et l’éosine, qui colore le cytoplasme et le collagène en rose. C’est la coloration de routine qui donne une vue d’ensemble de l’architecture et des cellules. Les colorations spéciales ciblent des composés précis : PAS pour les polysaccharides, trichrome pour le collagène, Perls pour le fer, Ziehl-Neelsen pour les bacilles acido-alcoolo-résistants. Un résultat doit toujours être interprété avec des contrôles et en connaissant les limites de la technique.

L’immunohistochimie utilise un anticorps qui reconnaît un antigène tissulaire, puis un système de révélation colorée. L’immunofluorescence remplace le chromogène par un fluorochrome et permet de localiser plusieurs cibles, mais nécessite un microscope adapté. L’hybridation in situ détecte des séquences d’ADN ou d’ARN, par exemple virales ou amplifiées. Ces techniques sont très sensibles, donc des contrôles positifs et négatifs sont indispensables pour distinguer un vrai signal d’un artefact.

Le microscope optique suffit à la plupart des diagnostics histologiques, avec une résolution d’environ 0,2 µm. Le microscope électronique, à transmission ou à balayage, atteint une résolution nanométrique et explore l’ultrastructure. L’examen extemporané par congélation permet une réponse rapide pendant une chirurgie, mais avec une qualité morphologique inférieure. La pathologie numérique transforme les lames en images analysables, sans supprimer le contrôle qualité. Traçabilité, calibration et validation des résultats restent essentielles.